一、滅菌
1、常壓滅菌將培養料袋分層置放滅菌鍋內，加熱至100℃，保持10小時，停火燜5小時～6小時，然后將袋取出冷卻接種。
2、高壓滅菌用大容量高壓滅菌鍋，料袋亦分層放置，保持壓力1.2千克/平方厘米2小時，然后自然冷卻至壓力為零時，開鍋蓋將料袋取出冷卻。大容量滅菌鍋滅菌時，如將壓力升至1.5千克/平方厘米則易發生熔袋、脹袋現象，影響滅菌效果。
二、接種與培養
當料袋冷卻至30℃以下時移入接種箱接種，接種箱用高錳酸鉀、甲醛熏蒸滅菌，20分鐘進行無菌操作接種。接種從料袋兩端進行，一般每瓶菌種可接25袋。接種后可將料袋直接移入大棚培養發菌。移入前大棚應充分消毒，開窗降低棚內溫度，用石灰水噴灑地面和四壁，然后用甲醛或硫磺密閉熏蒸24小時。如采用冬暖蔬菜大棚栽培猴頭菇，可先將接種后的料袋單獨置于培養室培養至菌絲吃料深達2厘米左右，再移入大棚內繼續培養。料袋呈墻式排放，每行疊放6層，底面鋪一層磚，行間距60厘米，以便于管理。
發菌培養期間要加強通風管理，棚頂適當加放草簾遮蔭，控制棚內溫度不超過27℃，約經30天，菌絲接近發滿時，倒袋檢查，清除有較重雜菌污染的菌袋，生長健壯的菌袋即可進行出菇管理。
