美味側耳ITS序列直接測序與克隆測序比較分析

The Comparative Analysis of the ITS Sequences in Pleurotus sapidus Obtained by Direct and Cloned Sequencing

鄭和斌　 王作仁　 呂作舟　 余知和　

摘　要：用CTAB法提取美味側耳基因組DNA,利用引物ITS1和ITS4擴增其核糖體DNA的ITS片段,凝膠回收試劑盒純化目的片段.通過PCR產物雙向直接測序和克隆測序分別獲得其rDNA ITS序列,對兩種測序方法所得序列及GenBank中美味側耳ITS片段的序列進行比較分析.結果顯示,三條序列的差異非常小,兩種測序方法所得序列僅在兩端出現差異,序列內部完全一致.

關鍵詞：美味側耳;ITS;序列測定

分類號：S646.140.1　文獻標識碼：A

文章編號：1005-9873(2005)01-0001-04

作者簡介：鄭和斌(1979-),男,華中農業大學應用真菌研究所在讀碩士研究生,主要從事側耳屬真菌的系統分類及人工栽培研究.余知和,本文通訊作者

作者單位：鄭和斌（華中農業大學植物科技學院,武漢,430070;長江大學生命科學學院,荊州,434025）　

　　　　　王作仁（華中農業大學植物科技學院,武漢,430070）　

　　　　　呂作舟（華中農業大學植物科技學院,武漢,430070）　

　　　　　余知和（長江大學生命科學學院,荊州,434025）　

參考文獻：

［1］凌建亞,彭俊峰.核糖體DNA ITS區應用于蟲草屬無性型鑒定的初步研究[J].山東農業大學學報 (理學版),2003,38(3):113～117.

［2］Iwen PC,Hinrichs SH,Rupp ME.Utilization of the internal transcribed spacer regions as molecular targets to detect and identify human fungal pathogens[J].Med Mycol,2002,40:87～109.

［3］Bunyard BA,Chaichuchote S,Nicholson MS,et al.Ribosomal DNA analysis for resolution of genotypic classes of Pleurotus[J].Mycol Res,1996,100 (2): 143～150.

［4］Brower AVZ,DeSalle R,Vogler A.Gene trees,species trees and systematics:acladistic perspective[J].Annu.Rev Ecol Syst,1996,27: 423～450.

［5］馬富英,羅信昌.分子標記在食用菌遺傳育種中的應用[J].菌物系統,2002,21(1):147～151.

［6］Lnnis MA,Gelfand DH,Sninsky JJ,et al.PCR protocols: A guide to methods and application[M].Academic Press,Inc.San Diego,CA,1990.315～322.

［7］金冬雁,黎孟楓等譯,侯云德等校.分子克隆實驗指南(第二版)[M].北京:科學出版社,1996.

食用菌學報

ACTA EDULIS FUNGI

2005 Vol.12 No.1 P.1-4