【作者】陳堅(jiān) 翁伯琦 陳彬 雷錦桂 朱炳耀 王義祥 楊志敏 江枝和

【機(jī)構(gòu)】福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)科院土壤肥料研究所

【摘要】根據(jù)鏈霉素磁珠和生物素特異結(jié)合的特性,用生物素標(biāo)記的二聚核苷酸重復(fù)序列探針從巴氏蘑菇的基因組中分離微衛(wèi)星序列。將結(jié)合于鏈霉素磁珠上的標(biāo)記探針同兩端連接已知序列人工接頭的巴氏蘑菇DNA酶切片段雜交。洗脫未雜交DNA片段后,用磁珠富集的片段建立微衛(wèi)星文庫。挑取522個(gè)菌落用對(duì)應(yīng)重復(fù)序列為引物進(jìn)行PCR篩選,得到48個(gè)陽性克隆,經(jīng)測(cè)序有32個(gè)菌落含微衛(wèi)星序列。微衛(wèi)星富集效率為陽性克隆數(shù)的67%,總克隆數(shù)的6%。除去重復(fù)或無效的微衛(wèi)星序列,在設(shè)計(jì)出的12對(duì)用于鑒別85個(gè)巴氏蘑菇的Co60輻射變異株微衛(wèi)星引物中,有4對(duì)引物總共擴(kuò)增出明顯的變異菌株17個(gè)。證明有些微衛(wèi)星位點(diǎn)可用于巴氏蘑菇輻射變異品種的指紋篩選與鑒別。 

【基金】福建省科技廳項(xiàng)目(Nos.2002N047,2008N0026)； 國家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(No.2012BAD14B15)；

【關(guān)鍵詞】簡單序列重復(fù); 鏈霉素磁珠; 生物素標(biāo)記探針; 擔(dān)子菌門; 分子標(biāo)記;