【作者】王劍鋒 陳今朝 梁華正 饒軍 李江
【機構】東華理工大學生物系 長江師范學院生物系
摘要：黑曲霉Aspergillus niger發酵豆渣產β-葡萄糖苷酶(BGL)。粗酶液依次經過乙醇沉淀和DEAE-Sepharose Fast Flow離子交換層析,獲得了兩種電泳純的β-葡萄糖苷酶BGL1和BGL2,它們的相對分子質量分別為102kDa、97kDa,總酶活回收率達到48%。在pH2.5及溫度為55℃時,兩種BGL水解京尼平苷的速度均達到最大;BGL水解活性受到Na+的激活但不受K+的影響,但Mg2+、Ba2+、Cu2+、Fe2+、Zn2+和Hg+等離子對BGL活性有不同程度的抑制作用(其中對BGL1的抑制普遍強于BGL2),而且同一種離子對不同BGL活性的影響性質不同,Ca2+顯著激活BGL1而對BGL2無影響,Fe3+顯著抑制BGL1而激活BGL2。在同樣條件下,BGL對對硝基苯-β-D吡喃葡萄糖苷(pNPGlu)、對硝基苯-β-D吡喃半乳糖苷(pNPGal)和水楊苷均有催化活性,其中對pNPGlu的Km值最小,BGL1、BGL2分別為0.764和1.934mmol/L;而BGL對京尼平苷水解的催化效率最高,BGL1、BGL2的Kcat/Km值分別為4.28×104和1.04×105L/mol·s。BGL1、BGL2活性的pH穩定范圍相近,分別為pH2.0-7.0、pH2.0-8.5,但它們的熱穩定性差異較大,55℃時BGL2保溫60min,酶活保留了60%,而BGL1的酶活半衰期只有10min。
關鍵詞：同工酶; 乙醇沉淀; 對硝基苯-β-D吡喃葡萄糖苷; 京尼平;