【作者】張婕 謝晨 郭曉紅 李多川
【機構】山東農業大學植物保護學院環境生物系
摘要：研究通過RT-PCR和Tail-PCR技術從嗜熱子囊菌原變種Thermoascus aurantiacus var.aurantiacus中克隆了一個幾丁質酶同源基因。該基因全長1,253bp,包含一個由1,197個堿基構成的開放閱讀框,編碼398個氨基酸。序列比對分析表明,該基因編碼蛋白屬于糖苷水解酶18家族的幾丁質酶。利用基因重組的方法構建酵母分泌型表達載體,并轉化畢赤酵母。在甲醇的誘導下,重組蛋白得到了高效表達,第6天的表達量最高,達到0.433g/L,酶活力為28.96U/mg,同時對表達的幾丁質酶進行了純化,SDS-PAGE檢測該蛋白的分子量為43.9kDa。該幾丁質酶的最適反應溫度為60℃,最適反應pH值為8.0,70℃處理30min仍有45%的相對酶活,具有較好的熱穩定性及工業應用價值。
基金：國家“863”計劃；
關鍵詞：幾丁質; 嗜熱真菌; 嗜熱酶; 編碼基因; 畢赤酵母;