培育有機雙孢菇三級菌種多以麥粒為原料，在實際生產中發現污染率較高，或出現異常現象，究其原因，就是菌種生產操作的不規范所致。現提出具體規范操作技術，供菇農朋友參考。
1.有機雙孢菇原料處理：牛糞破碎處理后過篩，按1∶1.2加水拌勻，堆積發酵，每天翻堆一次，約20天左右，牛糞粉變為褐色、具有正常發酵草料的清香氣味，曬干備用。無受潮的小麥，充分泡透后撈出，適當遮陰、通風，發現表皮發干時，輕噴細霧濕潤，24小時后即可發芽，待麥芽長至1-2厘米時，即可使用。
如果有蟲蛀麥粒，也可使用，但蟲蛀后的麥粒有孔洞，淀粉易流出，所以，必須多清洗幾遍;然后倒入pH值8-9的石灰水中，浸泡6小時后煮20分鐘左右，至麥粒無白心時，撈出麥粒，冷水沖洗后即可。
2.有機雙孢菇基本種植：麥粒(以干品計)100公斤、牛糞粉30公斤、石膏粉1公斤、碳酸鈣1.5公斤。
3.基質混合：將麥粒與牛糞粉按1∶0.2比例混合，并同時拌入其他輔料，注意使牛糞全部粘附到麥粒上，水分不足時適量噴水。剩余牛糞粉待用。
4.裝瓶操作：一般小批量生產多不采用標準瓶，而利用酒瓶、葡萄糖玻璃瓶等，裝瓶滅菌。為降低生產成本，可用 500毫升輸液瓶。先裝一把牛糞粉在瓶底，約1-1.5厘米厚，再裝麥粒，裝瓶時稍蹾瓶，使麥粒至瓶肩以下1厘米處，然后，再裝入1-2把牛糞粉，并用 “L”形工具將之攤平、壓實，之后塞入棉塞。
5.有機雙孢菇滅菌冷卻：采用高壓滅菌方法，壓力維持在0.15兆帕，保持2-2.5小時。滅菌結束后，壓力下降至零后，可取出料瓶，移入冷卻室或接種室，室內提前3天清理干凈，并噴灑百病傻溶液，料瓶降溫至30℃時即可接種。
6.有機雙孢菇接種操作：室內噴灑一遍賽百09溶液后，將原種用75%酒精擦洗一次，打開接種凈化機，10分鐘后即可開始接種操作。每瓶(500毫升)原種可接40瓶以上。
