1.母種培養基
(1)麥芽糖酵母瓊脂培養基(MYA)大豆蛋白胨(豆胨)1克、酵母2克、麥芽糖20克、瓊脂20克，加水至1000毫升。
(2)馬鈴薯葡萄糖酵母瓊脂培養基(PDYA)馬鈴薯300克(加水1 500毫升，煮20分鐘，用濾汁)、酵母2克、豆胨1克、葡萄糖10克、瓊脂20克，加水至1 000毫升。
(3)燕麥粉麥芽糖酵母瓊脂培養基(DMYA)燕麥粉80克、麥芽糖10克、酵母2克、瓊脂20克，加水至1 000毫升。
上述3種配方中如不加瓊脂，即可作為液體培養基。以上培養基需按常規配制、分裝、滅菌、接種和培養。
2.原種和栽培種培養基
(1)小麥稈或裸麥稈，切碎(長2～3厘米)，泡濕，裝瓶,高壓滅菌后備用。
(2)小麥、裸麥，高粱、玉米、小米等谷粒浸泡，煮透至沒有白芯但表皮不破，加2%碳酸鈣，裝瓶，高壓滅菌后備用。
(3)木屑和小木片各40%、麩皮20%，制作栽培種培養基。
3.接種
可以用培養3～4天的液體菌種接種。若用固體菌種必須加大接種量(菌種／培養料)，接種量最少10%，最好15%～20%。
4.培養
接種后，把菌種瓶或袋放在20～28℃培養室中培養。大球蓋菇菌絲生長幾天后，菌絲生長速度會逐漸緩慢，加速菌絲生長的方法是攪拌。用液體菌種接種的無菌麥粒培養基，每隔3～7天搖瓶一次，把菌絲搖斷，可以刺激菌絲再生，能保證菌絲生長旺盛。
