【作者】張煜 劉剛 余少文 湯新 邢苗

【機構】深圳大學生命科學學院 深圳市微生物基因工程重點實驗室 深圳大學生命科學學院深圳市微生物基因工程重點實驗室 深圳518060

【摘要】本工作采用巴氏畢赤酵母Pichiapastoris表達系統進行了里氏木霉Trichodermareesei纖維二糖水解酶Ⅱ(CellobiohydrolaseII)的表達。用RT-PCR的方法從經稻草粉誘導的里氏木霉培養物中分離出纖維二糖水解酶Ⅱ的基因,將其插入到巴氏畢赤酵母的表達載體pPICZαA中,并使之處于α-因子信號肽序列的下游,得到重組質粒pPICZαA-cbh2。通過電穿孔的方法用線性化的pPICZαA-cbh2轉化巴氏畢赤酵母GS115菌株,經過大量篩選后得到可以高效表達纖維二糖水解酶的畢赤酵母菌株P.pastorisCBHⅡ1。在甲醇誘導的條件下培養P.pastorisCBHⅡ1,培養液中的CMC活性可達到3.82U/mL,SDS-PAGE分析結果表明纖維二糖水解酶在P.pastorisCBHⅡ1中的表達量遠遠高于里氏木霉。對表達產物進行了LC-MS分析,結果表明所表達的蛋白為里氏木霉的纖維二糖水解酶。 

【基金】深圳市科技計劃重點項目資助；

【關鍵詞】纖維素酶; 整合表達; 液質聯用; 羧甲基纖維素;