【作者】金凱 張永軍 羅志兵 林健文 裴炎

【機構】西南大學生物技術中心農業部生物技術與作物品質改良重點實驗室重慶市農業生物技術重點實驗室西南大學生物技術中心農業部生物技術與作物品質改良重點實驗室重慶市農業生物技術重點實驗室 重慶400716

【摘要】綠色熒光蛋白(GFP)作為一種重要的報告基因,在病原菌和寄主之間的互作研究中具有良好的應用前景。利用草丁膦抗性基因bar為篩選標記,構建了組成性表達綠色熒光蛋白基因egfp的載體pBG,并轉入球孢白僵菌獲得成功表達。將轉化子接種菜青蟲進行生物測定表明,組成性表達egfp不影響球孢白僵菌的毒力。進一步利用冰凍切片和熒光顯微觀察技術監測球孢白僵菌侵染寄主行為,結果顯示,通過熒光觀察可清楚的檢測到病原菌在昆蟲體表的附著、菌絲穿透體壁以及菌絲從寄主體內長出等侵染過程。由此表明,GFP可有效用于球孢白僵菌的遺傳標記,進行病原菌的鑒別、侵染致病機理及相關功能基因的表達模式研究。 

【基金】國家自然科學基金(No.30471174)； 國家重點基礎研究計劃(973)項目(No.2003CB114203)；

【關鍵詞】昆蟲病原真菌; 轉化; 冰凍切片; 熒光檢測;