【作者】孫墨可 張曼 田娟 李曉薇 李海燕 李玉
【機構】白城市農業科學院生物技術實驗室 吉林農業大學生物反應器與藥物開發教育部工程研究中心 吉林農業大學食藥用菌教育部工程研究中心
摘要：靈芝Ganoderma lingzhi是我國著名的藥用真菌。但是,作為一種營養和保健價值都非常高的大型擔子菌,靈芝還缺乏完善的轉基因方法和安全轉基因體系。本研究建立了免疫調節蛋白基因的過表達系統,并利用真菌特異性啟動子GPD、終止子NOS和目的基因LZ-8構建真菌特異性雙T-DNA表達載體p SB130NG-LZ8;利用溶壁酶提取靈芝原生質體,并用FDA染色法檢測靈芝原生質體活性,原生質體成活率約為80%。通過PEG轉化法對靈芝原生質體成功進行了轉化,轉化得到的原生質體在帶有潮霉素抗性平板上長出,轉化率為3–4/μgpSB130NG-LZ8+107個原生質體。轉化子通過PCR檢測和熒光定量PCR檢測,獲得LZ-8在靈芝中的過表達。
基金：吉林省重點科技攻關項目(20150204027NY)~~；
關鍵詞：靈芝; 雙T-DNA載體; 目的基因LZ-8; PEG轉化法; 熒光定量PCR;