【作者】孫墨可張曼田娟李曉薇李海燕李玉

【機構(gòu)】白城市農(nóng)業(yè)科學院生物技術(shù)實驗室吉林農(nóng)業(yè)大學生物反應器與藥物開發(fā)教育部工程研究中心吉

摘要：靈芝Ganoderma lingzhi是我國著名的藥用真菌。但是,作為一種營養(yǎng)和保健價值都非常高的大型擔子菌,靈芝還缺乏完善的轉(zhuǎn)基因方法和安全轉(zhuǎn)基因體系。本研究建立了免疫調(diào)節(jié)蛋白基因的過表達系統(tǒng),并利用真菌特異性啟動子GPD、終止子NOS和目的基因LZ-8構(gòu)建真菌特異性雙T-DNA表達載體p SB130NG-LZ8;利用溶壁酶提取靈芝原生質(zhì)體,并用FDA染色法檢測靈芝原生質(zhì)體活性,原生質(zhì)體成活率約為80%。通過PEG轉(zhuǎn)化法對靈芝原生質(zhì)體成功進行了轉(zhuǎn)化,轉(zhuǎn)化得到的原生質(zhì)體在帶有潮霉素抗性平板上長出,轉(zhuǎn)化率為3–4/μgpSB130NG-LZ8+107個原生質(zhì)體。轉(zhuǎn)化子通過PCR檢測和熒光定量PCR檢測,獲得LZ-8在靈芝中的過表達。 

 

基金：吉林省重點科技攻關(guān)項目(20150204027NY)~~；

 

關(guān)鍵詞：靈芝; 雙T-DNA載體; 目的基因LZ-8; PEG轉(zhuǎn)化法; 熒光定量PCR;