【作者】郭麗瓊 王秀旭 柳永 舒薇 林俊芳

【機(jī)構(gòu)】華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院生物工程系華南農(nóng)業(yè)大學(xué)測(cè)試中心華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院生物工程系 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)生物質(zhì)能研究所廣州 510640

【摘要】利用從香菇菌絲體中克隆的啟動(dòng)子片段gpd-Le(613bp)和ras-Le(715bp)分別連接于報(bào)告基因gfp(綠色熒光蛋白基因)的上游,構(gòu)建了啟動(dòng)子功能活性檢測(cè)表達(dá)質(zhì)粒pLg-gfp和pLr-gfp。采用PEG介導(dǎo)法把表達(dá)質(zhì)粒pLg-gfp和pLr-gfp分別與輔助質(zhì)粒pCc1001(含有trp1基因)共轉(zhuǎn)化進(jìn)色氨酸營養(yǎng)缺陷型的灰蓋鬼傘粉孢子的原生質(zhì)體中。經(jīng)過選擇培養(yǎng)基篩選、假定轉(zhuǎn)化子的分子鑒定以及GFP熒光檢測(cè)。結(jié)果表明:香菇gpd-Le啟動(dòng)子在灰蓋鬼傘的菌絲中具有較強(qiáng)驅(qū)動(dòng)外源gfp基因表達(dá)的活性,在熒光顯微鏡和共聚焦顯微鏡下觀察到gfp基因表達(dá)的綠色熒光。而香菇ras-Le啟動(dòng)子沒有檢測(cè)到有驅(qū)動(dòng)外源gfp基因表達(dá)的活性。 

【基金】國家自然科學(xué)基金(No．30371000,39960050,30060054)； 廣東省科技攻關(guān)(No．2004820101001)； 廣東省自然科學(xué)基金(No．5006680,032239)；

【關(guān)鍵詞】香菇; 啟動(dòng)子活性; 灰蓋鬼傘; 共轉(zhuǎn)化; gfp基因;