【作者】王紅寧 馬孟根 吳琦 劉世貴 羅燕

【機(jī)構(gòu)】四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院；四川大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院；

【摘要】從黑曲霉N25(A.niger China strain)中提取出染色體DNA,根據(jù)已經(jīng)測(cè)定出的植酸酶phyA基因全序列設(shè)計(jì)了一對(duì)引物,采用高保真度的聚合酶Advangage-HF擴(kuò)增到了去除信號(hào)肽和內(nèi)含子后約1.4kb片段,對(duì)該片段進(jìn)行了克隆及序列測(cè)定。將該序列與植酸酶phyA基因全序列進(jìn)行了比較。以此片段構(gòu)建成功了pPIC9K-phyA載體(命名為pPNP-1),并轉(zhuǎn)化畢赤巴斯德酵母。經(jīng)G418抗性篩選、酶活性測(cè)定、Southern印跡和Western印跡,獲得了高效表達(dá)的轉(zhuǎn)化子PP-NP-1(23869.4u/ml)、PP-NP-2(20533.0u/ml)、PP-NP-3(35646.7u/ml),其酶活性分別是出發(fā)菌株的酶活(513.4u/ml)的46.46倍、39.99倍和69.46倍,且轉(zhuǎn)化子具有很好的遺傳穩(wěn)定性。 

【基金】獲國(guó)家科技部“九五”國(guó)家重點(diǎn)科技攻關(guān)計(jì)劃資助；

【關(guān)鍵詞】黑曲霉; 植酸酶; phyA基因; 畢赤酵母; 高效表達(dá);